RNA甲基化m6A测序服务

尽管当下已经开发了多种m6A检测和测序方法，但是现有的技术仍然存在几个重要的局限性：

（1） 基于m6A抗体的检测方法无法获得其高分辨率的位点信息

（2）基于限制性内切酶的检测技术只能检测含有ACA 基序的m6A

（3）基于三代测序和机器学习的方法面临价格昂贵、检测准确性低等问题

迄今为止，对m6A全转录组的无偏好检测和绝对定量仍未得到解决。 开发的m6A检测技术GLORI (Glyoxal and nitrite-mediated deamination of unmethylated adenosine) 突破了以上技术的局限性，首次实现了高效率、无偏好的检测单碱基m6A位点，并对m6A位点的修饰水平进行绝对定量。

GLORI的原理类似于检测DNA 5mC修饰的Bisulfite技术 ，利用乙二醛催化和亚硝酸盐介导的未甲基化腺苷脱氨转化为次黄嘌呤，而不影响m6A上的氨基，测序通读时腺苷（A）被读为“G”，m6A被读为“A”， 根据A的位置和A比率(A占总覆盖率的百分比)对m6A进行单碱基分辨率下的绝对定量检测。

具体实验流程如下图所示：

（1）获得样本的Total RNA，去除rRNA获得mRNA

（2）将mRNA打断成150nt左右的小片段

（3）利用乙二醛催化和亚硝酸盐介导的化学反应将常规腺苷（"A"）脱氨转化成肌酐（“I”）

（4）对反应后的mRNA进行文库构建，高通量测序时“I”被通读为“G”，m6A被读为“A”，并对测序数据进行生物信息学分析